Autogra pha californica multiplenucleopolyhedrovirusunun (AcMNPV) Spodoptera frugiperda larvaları üzerindeki böcek öldürücü etkinliği ve biyolojik kontrol etkisi

Soyut

Sonbahar tırtılı Spodoptera frugiperda, Çin'e yeni girmiş mısırın en önemli zararlılarından biridir. Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV)'nin S.frugiperda larvaları üzerindeki insektisidal aktivitesi ve AcMNPV'nin S.frugiperda üzerindeki biyokontrol etkisi, biyoanaliz ve saha etkililik testi yöntemleriyle incelendi ve analiz edildi. Sonuçlar, medyan öldürücü konsantrasyonun (LC)₅₀)2'ye etki eden AcMNPV'nin^veS.Frugiperda'nın dönem larvaları 2,9x idi 10⁷PIB/mL. Ortalama kontrol etkinliği 10⁷PIB/mL AcMNPV+Bt süspansiyonu(1500 mL/hm)²) S.frugiperda'da 10'da %68,99 idi.^ogün ve 15'inde %66,87^oSon olarak, ölü böceklerin DNA homolojisini belirlemek için DNAMAN 6.0 yazılımı kullanıldı ve sonuçlar, ölü böcek ve S．Frugiperda'nın polh,lef-8 ve lef-9 gen dizi dizilerinin 100 olduğunu gösterdi. % aynı.Yukarıdaki sonuçların tümü ayrıca AcMNPV'nin S．frugiperda．kontrol etmede anahtar rol oynayabileceğini doğrulayabilir.10⁷PIB/mL AcMNPV＋BT süspansiyon (1500mL/hm)²) S.frugiperda'nın genç larvalarının ortaya çıktığı zirve zamanda ve yüksek sıcaklık ve ışığın etkisinden kaçınmak için güneşli bir günde saat 16:00-17:00'den sonra uygulanmalıdır, böylece virüs preparatı daha iyi bir performans gösterebilir. rolü ve S.frugiperda üzerindeki kontrol etkisini geliştirin.

Anahtar Kelimeler: AcMNPV;Spodoptera frugiperda;Lepidopteranpest;larva;biyo-pestisit;AcMNPV＋Bt Süspansiyonu;böcek öldürücü aktivite;yeşil önleme ve kontrol

Spodoptera frugiperda, ilk olarak 2019 yılında Myanmar'dan Çin'e giren ve hızla Çin'deki 26 il ve belediyedeki 1.518 bölgeye yayılarak Çin'in gıda güvenliği için ciddi bir tehdit oluşturan, omnivor, göçmen bir zararlıdır. Şu ana kadar Ordu kurdunun kontrol stratejisinde, Ordu kurdu salgınının kontrolü hala kimyasal pestisitlerin yoğun kullanımına bağlıdır.Kimyasal pestisitlerin aşırı kullanımı kolayca haşere direncine, yeniden yaygınlaşmasına ve çevresel kalıntı ve kirliliğe neden olabilir.Bir dizi ciddi sorun, modern tarımın sürdürülebilir gelişimini ciddi şekilde kısıtlamıştır. Bu nedenle biyolojik mücadele yöntemlerinin veya biyopestisit ikamesinin kullanılması.Ordu kurdunu kontrol etmek için pestisitlerin kullanımı giderek daha önemli hale geliyor ve artan ilgi görüyor.

Autographa californica çoklu nükleopolihedrovirüs AcMNPV, Argyria yonca larvasından izole edilen çok taneli gömülü bir nükleer polihedroz virüsüdür. Pancar güvesi, lahana güvesi, Argyria argyra ve Calyptera teristoides gibi 30'dan fazla lepidopteran zararlı türünü çapraz enfekte edebilir. Bt ve diğer insektisitler ve hedef dışı haşere virüsleri ile sinerjist olarak karıştırılan tip, birçok Noctuidae zararlısı üzerinde belirgin bir sinerjistik etkiye sahiptir ve böcek öldürücü spektrumu daha da genişletir ve böcek öldürücü etkiyi geliştirir.AcMNPV, Wuhan Unioasis Biological Technology Co., LTD tarafından geliştirilen yeni bir böcek virüsü biyopestisitidir.Argyria yonca nükleer polihedroz virüsü ve Bt potent virüs sinerjistinin bir kombinasyonudur.İyi böcek öldürücü aktiviteye sahip olan A, sebzelerde, meyve ağaçlarında, pirinçte ve diğer alanlarda yaygın olarak uygulanmaktadır.Bu yazıda, Autographa californica çoklu nükleopolihedrovirüsün (AcMNPV) Spodoptera frugiperda'ya karşı insektisidal aktivitesi ve biyokontrol etkisi, nükleer polihedroz virüsünün geniş uygulama alanı için veri desteği sağlamak amacıyla laboratuvar aktivite analizi ve saha deneyi ile tespit edildi ve değerlendirildi. Mısırda Spodoptera frugiperda'nın biyolojik kontrolü.Ordu kurdunun kontrolünde AcMNPV artı Bt'nin süspansiyon maddesinin tescili ve uygulanması için teorik temel sağlar.

1.Malzemeler ve yöntemler

1.1Virüsleri ve biyolojik ajanları test edin

Test edilen virüs Autographa californica çoklu nükleopolihedrovirüstür (AcMNPV). 20 Mayıs 2019'da Spodoptera frugiperda, Hubei Eyaleti, Xiantao Şehrindeki mısır tarlasından toplandı ve virüs enfeksiyonu tarama testi, Wuhan Unioasis Biological Technology Co. laboratuvarında gerçekleştirildi. , LTD.(Autographa Californica multiplenucleopolyhedrovirus AcMNPV'nin Spodoptera frugiperda'ya karşı yüksek bulaşıcı aktiviteye sahip olduğu), Spodoptera frugiperda larvaları çoğalmak ve çoğalmak için büyütüldü. Virüsle enfekte olan ölü larvalar suyla öğütüldü, 3 kat gazlı bezden süzüldü ve süzüntü 600 dev/dak ve 300 dev/dak'da santrifüj edildi. Mikro sayım 1,8 x 106 idi¹⁰mL başına öldürücü çokyüzlüler (Polyhedralinclusionbody PIB), yani saf bir Polihedroz virüsü (1,8 x 10) Teknik sınıfı elde etmek için¹⁰PIB/mL), düşük sıcaklıkta muhafaza edildi ve bir kenara bırakıldı.

Test edilen biyolojik ajan, kısa AcNPV.Bt (1,0 x 107 PIB/mL) için Autographa california nükleer polihedrosis.Bacillus thuringiensis'ti.Wuhan Unioasis Biological Technology Co., LTD tarafından geliştirilmiş ve yan kuruluşu Wuhan Chuqiang Biological Technology Co., LTD tarafından üretilmiştir.

1.2Böcekleri test edin

Deneysel böcek Spodoptera frugiperda idi.20 Temmuz 2019'da Spodoptera frugiperda larvaları, Hubei Eyaleti, Tongshan İlçesi, Dachangzhen Kasabası, Banqiao köyündeki yazlık mısır tarlasından toplandı ve Hubei Tarım Akademisi Bitki Koruma Toprak ve Gübre Araştırma Enstitüsü laboratuvarına geri getirildi. Bilim.Taze ve yumuşak mısır yaprakları, tek kullanımlık plastik petri kaplarında (çap 8cm, yükseklik 3cm) tek kafalı olarak beslendi.İç mekan besleme koşulları:(25±1)°C ve bağıl nem %60-%70, fotoperiyot 16L:8D idi.Birden fazla nesil üremenin ardından taze ve sterilize edilmiş yumurta blokları kullanım için saklanır.

1.3Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus'un (AcMNPV) spodoptera frugiperda'ya karşı laboratuvar aktivitesi

Altı konsantrasyon gradyanı, 1,0 ×10⁹, 1,0 ×10⁸, 1,0 ×10⁷, 1,0 ×10⁶, 1,0 ×10⁵, 1,0 ×10⁴Bu deneyde tasarlandı. İlk olarak AcNPV'nin TC'si 1,0 x106'ya seyreltildi.⁹PIB/mL ve daha sonra 10 kez seyreltilerek farklı konsantrasyonlarda diğer seyrelticiler elde edildi. Deney, kör kontrol ile işlendi. Toplam 7 işlem gerçekleştirildi ve her işlem 3 kez tekrarlandı.

Yaprak segmenti besleme yöntemi benimsendi, yani taze mısırın genç yaprakları (uzunluk 2 cm x genişlik 2 cm) ilk önce virüs süspansiyon spreyi ile muamele edildi, ardından larvalar beslendi ve tek baş petri kaplarında beslendi.Besleme şeritleri şunlardı: sıcaklık (25±1)°C, faz-nem (%60 ~ %70), fotoperiyod (16L:8D). Toksik mısır yaprakları yenildikten sonra, toksik olmayan taze mısır yaprakları eklenmelidir. Ordukurdu'nun 48 ikinci dönem larvaları tekrar tekrar tedavi edildi. Referans bölüm 9{9-11}, Güve familyasının hücrelerinde ve konakçılarında virüsün çoğalmasındaki değişiklikler göz önüne alındığında, virüs nedeniyle ölen böceklerin sayısı ve enfeksiyondan 7 ve 10 gün sonra toplam ölü böcek sayısı araştırıldı ve ölüm oranı hesaplandı ve LC50 hesaplandı.

1.410 milyon AcMNPV.Bt süspansiyonunun Ordukurdu larvaları üzerindeki kontrol etkisine ilişkin saha testi

Saha etkililik testi, Hubei Eyaleti, Tongshan İlçesi, Chuangwang Kasabası, Xiaoyuan köyünün yazlık mısır tarlasında gerçekleştirildi.Test alanı toplam 1500m^２toprak tipi kireçli toprak, pH değeri 6,8, organik madde içeriği %13,9 ve verimlilik orta ila yüksek. Mısır tüm yıl boyunca ekiliyor ve mısır çeşidi Xiyu No. 3'tür. 13 Temmuz'da ,2020, %45 kompoze gübre 750kg//hm^２Taban gübresi olarak uygulanıp ekimi yapılacaktır.2019'dan beri bu alanda ciddi bir Sonbahar tırtılı vakası yaşanıyor.

Toplam 10 milyon AcMNPV.BT süspansiyonu (1500 mL/ hm)²) ve %15 emamektin benzoat. Indocarb süspansiyonu (300 mL/ hm)²), yaygın olarak kullanılan insektisit ve kör kontrol 3 uygulama ile tedavi edildi.Her bir uygulama, her biri 100 m2'lik bir alanı kapsayan toplam 12 deney parselinde 4 kez tekrarlandı.²

26 Ağustos 2020 öğleden sonra (Spodoptera frugiperda larvalarının sıklıkla görüldüğü dönemde), ilacı akşamları bir kez püskürtün.Lebang marka 3WBJ-16DZ çok fonksiyonlu sırt çantası elektrikli spreyi, 0,40 ~ 0,60 MPa çalışma basıncı, 1 mm delik çapı ve 60 ~ 85L/saat akış hızı ile kullanılır.Pestisit uygulamasının yapıldığı gün güneşlidir ve sıcaklık 23-32 ℉'dir.Uygulamadan sonraki 1., 3., 5., 7., 10. ve 15. günlerde anketler yapın.Araştırma sırasında her parselden 10 rastgele örnekleme noktası alınmış ve her noktada 10 bitki olmak üzere toplam 100 bitki sürekli olarak araştırılmıştır.Her bir mısır bitkisindeki canlı böcek, ölüm, zehirlenme ve doğal düşman sayıları kaydedildi.İlgili hesaplama formülü aşağıdaki gibidir;

Böcek oranının azalması =(uygulama öncesi canlı böcek sayısı - uygulama sonrası canlı böcek sayısı)/uygulama öncesi canlı böcek sayısı

Önleme ve kontrol etkisi=(İlaç alanında böcek oranının azalması-Kontrol alanında böcek oranının azalması)/(100-Kontrol alanında böcek oranının azalması)*100%

1.5ACMNPV'nin moleküler tanımlanması

1) Virüs örneklerini test edin.İç mekan aktivitesinin belirlenmesi için ACMNPV ana likörünü (örnek 1), biyolojik preparat 10 milyon ACMNPV.Bt SC'yi (örnek 2), saha etkililik testinden sonra virüs bulaşmış böcek cesetlerini (örnek 3) ve enfekte olmuş tırtılın ikinci nesil larvalarını seçin. 10 milyon ACMNPV.Bt'deki AcMNPV'nin sonbahar tırtılı larvalarına karşı bakterisidal aktiviteye sahip olup olmadığını doğrulamak için test virüsü numuneleri olarak numune 3'te (örnek 4) toplanan böcek cesetleri.

2) DNA ekstraksiyonu.1,0 mL AcMNPV numunesi alın, 99,0 mL damıtılmış su ekleyin ve 1 dakika boyunca iyice salınım yapın.Salınımdan sonra 300μL süspansiyon alın, 100μL alkali kırma solüsyonu ekleyin, 30 dakika boyunca 37 °C'de su banyosu yapın.200μL Tris·HCl tamponu ekleyin ve 10000 r/min hızında 8 dakika boyunca santrifüjleyin.Süpernatantı bir santrifüj tüpüne alın, 5μL Protease K ve 60 μL SDS ekleyin, 65 °C'de 2 saat su banyosu yapın, çıkarın ve oda sıcaklığına soğutun.650μL Mix L Tris doymuş fenol kuyucuğu ekleyin, 10000 r/min hızında 5 dakika santrifüj edin ve süpernatantı yeni bir santrifüj tüpüne alın.650μL karışık sıvı fenol ve kloroform (hacim oranı 1:1) karışımı ekleyin, 10000 r/min'de 5 dakika santrifüjleyin ve ardından süpernatantı yeni bir santrifüj tüpüne alın.650μL karışık sıvı kloroform ve izoamil alkol (hacim oranı 24:1) ekleyin, 10000 r/min'de 5 dakika santrifüjleyin ve son olarak süpernatantı yeni bir santrifüj tüpüne alın.Bir spektrofotometre kullanarak DNA konsantrasyonunu ölçün.

3) PCR amplifikasyonu.T3 super mix standart sistemini kullanma: Öncesi ve sonrası için örnek DNA 2 μ L. 0,5μL primerler, T3 super mix 18μL ve ddH₂O7μL.PCR amplifikasyon koşulu 95 °C'dir.3 dakikalık ön denatürasyondan sonra aşağıdaki döngüler gerçekleştirilir: 15 saniye boyunca 98 ° C'de, 20 saniye boyunca 52 ° C'de, 20 saniye boyunca 72 ° C'de ve son olarak 5 dakika boyunca 72 ° C'de, toplam 42 döngü.

4) DNA agaroz jel elektroforezi.PCR amplifikasyon ürünü 2μL ve 5 kb DNA Marker alın ve agaroz jele koyun ve 180 V'de 20 dakika boyunca elektroforetik yapın.Elektroforezden sonra jel görüntüleme sistemindeki PCR ürünlerini gözlemleyin.

Polh yukarı akış astarı:

AGGGTTTCCCAGTCACGGGCTGAG-GATCCTTT

Polh aşağı akış astarı:

GAGCGGATAATTTCACACTGGTGTGTG-CAAACTCCTT

Lef-8 yukarı akış astarı:

AGGGTTTCCCAGTCCACGCACGGGAAAT-GAC

Lef-8 aşağı akış primerleri:

GAGCGGATAATTTCACATTGTACGGATCTTTCGGC

Lef-9 yukarı akış primerleri

AGGGTTTCCCAGTCACGAAACGGGTACGCGGG

Lef-9 aşağı akış primerleri:

GAGCGGATAATTTCACATTGTCACCGTCAGTC

Son olarak, ölçülen polh, lef-8 ve lef-9 dizilerini karşılaştırmak için DNAMAN6.0 yazılımını uygulayın.

1.6Veri analizi ve işleme

Deneysel veriler IBM SPSS 22.0 veri istatistiksel analiz yazılımı kullanılarak işlendi.

Virüs insektisit aktivitesinin belirlenmesi deneyinde, her bir konsantrasyon ile muamele edilen ölü ve canlı böceklerin sayısı sayılır ve ölüm oranı ve düzeltilmiş ölü yüzdesi hesaplanır ve olasılık değerlerine dönüştürülür.Her tedavinin konsantrasyonu lg değerlerine dönüştürülür.Virülans regresyon denklemi (eğim ± SE), çalışma olasılık değerleri ve ağırlıkları ve LC aracılığıyla hesaplanır.₅₀Değeri ve %95 güven limitini bulun ve son olarak ki-kare testini yapın (²).Tarla kontrol etkisi deneyinde, her bir ilaçlamadaki canlı böcek sayısı sayılarak, zararlının azalma oranı hesaplanmıştır.Kontrol etkisi Microsoft Excel düzenleme formülü kullanılarak hesaplandı.Analiz için Duncan'ın yöntemi kullanıldı ve tedaviler arasındaki anlamlı farklılıkları karşılaştırmak için tek yönlü ANOVA kullanıldı.

Metindeki grafiklerin tamamı Microsoft Excel yazılımı kullanılarak oluşturulmuştur.

2.Sonuçlar ve Analiz

2.1AcMNPV'nin Spodoptera frugiperda larvalarına karşı böcek öldürücü aktivitesi

İç mekan aktivite testinin sonuçları (Tablo 1), 7 günlük tedaviden sonra LC'nin₅₀AcMNPV'nin Spodoptera frugiperda'nın 2. dönem larvalarına etki etme oranı 4.1x10'dur⁷PIB/mL ve LC₉₀1,05x10⁸PIB/mL.10 günlük tedaviden sonra LC₅₀AcMNPV'nin 2. dönem larvalara etki etme oranı 2.9x10'dur⁷PIB/mL ve LC₉₀7,8x10⁷PIB/mL.LC₅₀ve LC₉₀AcMNPV'nin 7 günlük tedaviden sonra sonbahar tırtılının 2. dönem larvaları üzerindeki etkisinin her ikisi de 10 günden daha yüksekti; bu, AcMNPV'nin 7 günde Spodoptera frugiperda larvalarına karşı iyi bir böcek öldürücü aktivite sergilediğini gösterir.

2.2 AcMNPV'nin saha kontrol etkisi.Bt, Spodoptera frugiperda larvalarına etki eder

Saha etkinlik denemelerinin sonuçları 10 milyon AcMNPV'yi gösterdi.Bt SC (1500 mL/saat²) spodoptera frugiperda larvaları üzerinde nispeten yavaş bir etkiye sahipti.İlaçlamadan sonraki 1., 3. ve 5. günde ortalama kontrol etkisi sırasıyla %11,57, %16,23 ve %15,56 olmuştur.İlaçlamadan sonraki 7. günde ortalama kontrol etkisi sadece %21,88 idi.Ancak ilaçlamadan sonraki 10. günde böcek kontrol etkisi aniden %68,99'a yükselirken, ilaçlamadan sonraki 15. günde ortalama kontrol etkisi de %66,87 oldu.Ancak kimyasal ajanlarla karşılaştırıldığında Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb %15 (300mL/hm)²), spodoptera frugiperda'nın larvaları üzerinde böcek popülasyonunun sayısını hızla azaltabilen iyi bir öldürücü etkiye sahipti.İlaç tedavisinden sonraki 1., 3., 5. ve 7. günde ortalama kontrol etkisi sırasıyla %91,39, %92,66, %90,71 ve %87,19 idi.Ancak 10. günde ortalama kontrol etkisi düşmeye başlamış, sadece %67,63'e, 15. günde ise ortalama kontrol etkisi %51,60'a düşmüştür.Ayrıntılar için Tablo 2'ye bakın.

Aynı zamanda kontrol alanındaki böcek azalma oranının tedaviden sonraki 1., 3. ve 5. günlerde negatif olduğunu ve böcek sayısında artışa işaret ettiğini tespit ettik.Tedaviden sonraki 7. günde pozitifleşmeye başladı (böcek popülasyonu azalmaya başladı).10. ve 15. günlerde böceklerin ortalama azalma oranları sırasıyla %38,25 ve %47,00 olup, bu durum büyük olasılıkla spodoptera frugiperda larvalarının bir kısmının toprakta pupa olmaya başlaması ve 10-15 gün sonra nesillerin çakışması ile ilgilidir. .

Özetle 10 milyon AcMNPV'nin olduğu görülmektedir.Bt SC (1500 mL/saat²) spodoptera frugiperda üzerinde belirli bir kontrol etkisi vardır, ancak etkisi yavaştır ve etkinliği uygulamadan yaklaşık 10-15 gün sonradır.

2.3 AcMNPV'nin Etkileri.Bt doğal düşmanlara karşı

Saha deneyleri sırasında 10 milyon AcMNPV'nin etkisi.Örümcekler, uğur böceği ve böcekler gibi mısırdaki zararlıların doğal düşmanları üzerindeki Bt süspansiyonu da araştırıldı.Sonuçlar 10 milyon AcMNPV'nin olduğunu gösterdi.Bt süspansiyonu, 100 bitki başına ortalama 13,4 doğal düşman ile örümcek, uğur böceği ve böcek gibi doğal düşmanlara önemli bir zarar vermemiştir.Ancak Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb %15 süspansiyon kimyasal maddesinin örümcekler, uğur böceği ve böcekler gibi doğal düşmanlar üzerinde önemli bir toksik etkisi vardı.Tedaviden sonraki ilk günde 100 mısır bitkisindeki ortalama doğal düşman sayısı sadece 3,1 iken, tedaviden sonraki üçüncü günde çeşitli tiplerde yalnızca 5,2 doğal düşman bulundu (Şekil 1).AcMNPV'nin 10 milyon olduğu görülebilir.Bt süspansiyonu zararlıların doğal düşmanlarına karşı iyi bir koruyucu etkiye sahipken, Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb %15 süspansiyonu doğal düşmanlara nispeten daha fazla zarar verir.

2.4 AcMNPV'nin moleküler tanımlanması

Farklı test numunelerinin PCR amplifikasyon sonuçları, numune 1, 2, 3 ve 4'ün polh, lef-8 ve lef-9 amplifikasyon fragmanlarının tutarlı ve boyut olarak doğru olduğunu gösterdi.Polh, lef-8 ve lef-9 genlerinin PCR ürünleri sırasıyla 0,54, 0,716 ve 0,29 kb olmuştur (Şekil 2), bu da AcMNPV'nin spodoptera frugiperda larvalarına karşı böcek öldürücü aktiviteye sahip olduğunu kanıtlamaktadır.

Son olarak, 1, 2, 3 ve 4 numaralı numunelerde polh, lef-8 ve le.f-9'un güçlendirilmiş fragmanları üzerinde dizi hizalaması gerçekleştirmek için DNAMAN 6.0 yazılımı kullanıldı (Şekil 3).Sonuçlar, numune 1, 2, 3 ve 4'teki yükseltilmiş polh, lef-8 ve lef-9 dizileri arasındaki benzerliğin %100 olduğunu gösterdi; bu da numune 1, 2, 3 ve 4'ün hepsinin aynı virüs AcMNPV.

3. Tartışma

AcMNPV, böceklerin vücuduna beslenme yoluyla bulaşan, böcek çubuğu şeklinde bir virüstür.Virüs, böceğin vücudunda çoğalır ve yayılır, yavaş yavaş tüm vücuda bulaşır ve sonuçta ölüme yol açar.Bu çalışmanın sonuçları, AcMNPV'nin Spodoptera frugiperda larvalarına karşı iyi biyolojik aktiviteye sahip olduğunu göstermektedir.7. ve 10. günlerdeki LC'si sırasıyla 4.1x107 ve 2.9x107PIB/m idi ve sahada iyi kontrol etkileri gösterdi.10 milyon AcMNPV.Bt'nin (1500 mL/hm) karışık süspansiyonu²) tedaviden sonraki 10. ve 15. günlerde iyi bir ortalama kontrol etkisine sahip olup sırasıyla %68,99 ve %66,87'ye ulaştı ve doğal düşmanlar için güvenliydi.Bu nedenle AcMNPV'nin Spodoptera frugiperda'nın biyolojik kontrolünde daha büyük bir rol oynayabilmesi için araştırma ve geliştirme hızının hızlandırılması gerekmektedir.Wuhan Chuqiang Bioteknoloji Co., Ltd. tarafından üretilen 10 milyon AcMNPV.Bt süspansiyonu, virüsün böcek öldürücü aktivitesini önemli ölçüde artırabilen, AcMNPV ve biyopestisit Bacillus thuringiensis'in (Bt) bir bileşiğidir.Bt, iyi mikrobiyal insektisit aktiviteye sahip geniş spektrumlu bir insektisit olduğundan, AcMNPV, Bt ile birleştirildiğinde toksisitesi, tek bir formülasyona kıyasla önemli ölçüde geliştirilmelidir.Bu sadece Bt'nin böcek ilacı aralığını genişletmekle kalmıyor, aynı zamanda birden fazla zararlıyı kontrol etmek için tek bir formülasyon kullanma hedefine ulaşarak toksisitesini de arttırıyor.Bu aynı zamanda 10 milyon AcMNPV.Bt'nin askıya alınmasının sebzelerde, meyve ağaçlarında ve pirinçte yaygın şekilde teşvik edilebilmesinin nedenidir.Bu nedenle, 10 milyon AcMNPV.Bt, mısırdaki Spodoptera frugiperda için yeşil kontrol ajanı olarak tanıtılabilir

Bu çalışmada, saha etkinlik testleri yapılırken, kontrol alanındaki böcek popülasyonunun hızlı bir şekilde azalması durumunda (15. günde böcek azalma oranı %47,00'e ulaştı), 10 milyon AcMNPV.Bt'nin ortalama kontrol etkisi ortaya çıktı. süspansiyon (1500mL/hm)²Tedaviden sonraki 15. günde %66,87 olup hızlı bir yükseliş eğilimi gösterdi.Kimyasal pestisit %15 metoksazol · indefenkarb SC'nin (300 mL/hm) ortalama kontrol etkisi ise²) tedaviden sonraki 15. günde %51,60'a düştü.Her ne kadar 10 milyon AcMNPV.Bt süspansiyonunun (1500 mL/hm)²) Spodoptera frugiperda üzerinde 10 ila 15. günde belirli bir kontrol etkisi gösterir, biyolojik pestisitlerin yavaş etkinliği ve Spodoptera frugiperda larvalarının kısa ömrü ve örtüşen nesilleri göz önüne alındığında, araştırma sayısının arttırılması ve gerektiğinde araştırma süresinin uzatılması önerilir. Daha ideal deneysel sonuçlar elde edebilecek biyolojik pestisitlerin (özellikle viral preparatların) saha etkililik denemelerinin yapılması.Bu durum aynı zamanda bu çalışmanın bir sınırlılığıdır.Özetle, biyolojik ajanlarla karşılaştırıldığında, kimyasal ajanların zararlılar üzerinde öldürücü etkisi nispeten daha yüksek olup, daha hızlı etki göstermektedir.Zararlı salgınları sırasında acil önleme ve kontrol önlemi olarak kullanılabilirler.Zararlıların zararları nispeten hafif meydana geldiğinde biyolojik pestisitler, yeşil önleme ve kontrol önlemlerinden biri olarak kimyasal pestisitlerin yerini alabilir, böylece çevre kirliliğini azaltır ve tarımsal ekolojiyi koruma etkisine ulaşır.

Ek olarak, bu çalışmada kullanılan Polh (polihedrin) geni bir tür çokyüzlü protein promotörüdür, o ve P10, bakulovirüs ekspresyon vektör sisteminde (BEVS) en yaygın kullanılan promotördür ve her ikisi de geç aşamada yüksek oranda eksprese edilir. viral enfeksiyon^[13].Bununla birlikte, p10 promoterinin aktivitesi polh promoterininkinden daha düşüktür, dolayısıyla polh promoteri sıklıkla eksojen proteinlerin ekspresyonu için kullanılır.Lef-8 geni, virüsün kendi RNA polimerazının en büyük alt birimini kodlayabilir ve bir tür geç ekspresyon faktörüdür.^[14].lef-9, bakulovirüslerdeki protein kompleksi alt birimini lef-4, lef-8 ve p47 ile birlikte kodlayan bir tür geç ekspresyon faktörüdür.Araştırmalar, lef-9 genine sahip olmayan virüslerin bulaşıcı aktiviteye sahip virüs parçacıkları oluşturamayacağını, lef-9 genine sahip virüslerin ise virüsün bulaşıcı aktivitesini geri yükleyerek eski haline getirebildiğini buldu.Bu nedenle lef-9 geni, bakulovirüsün bulaşıcı aktiviteye sahip BV (Tomurcuklanmış Virüs) oluşturması için gerekli bir gendir.^[15].Lef-8 ve lef-9 genlerinin nükleer polihedroz virüslerinin farklı tiplerinde yüksek tutuculuğa sahip olduğu görülebilir, dolayısıyla lef-8 ve lef-9 genleri virüs tiplerinin tanımlanmasında temel olarak kullanılabilir.Bu nedenle, bu çalışmada tespit nesneleri olarak polh, lef-8 ve lef-9 kullanıldı ve gen dizisi hizalaması yoluyla homoloji yüksekti ve tümü %100'e ulaştı.Hızlı moleküler tespit yöntemi, AcMNPV'nin Spodoptera frugiperda'ya karşı iyi bir insektisidal aktiviteye sahip olduğunu bir kez daha doğruladı; bu, Spodoptera frugiperda'nın önlenmesi ve kontrolünde daha fazla tanıtım ve uygulama için uygundur.

Spodoptera frugiperda 2019'dan beri Çin'i istila etti ve önemli bir mısır zararlısı haline geldi.Çin'in güney ve güneybatısının bazı bölgelerinde yerleşik bir nüfus oluşturarak Çin'in mısır endüstrisinde büyük kayıplara neden oldu ve Çin'in gıda güvenliğini ciddi şekilde tehdit etti.^[16].Çin'de Spodoptera frugiperda'nın mevcut ciddi önleme ve kontrol durumuyla karşı karşıya kaldığımızda, Spodoptera frugiperda'nın önlenmesi ve kontrolü için etkili pestisitlerin taranmasını ve geliştirilmesini hızlandırmak acildir.^[17].Viral insektisitlerin, yavaş etki hızları ve dar insektisit spektrumları nedeniyle yaygın uygulamaları sınırlı olsa da, ekoloji ve çevre korumaya artan ilgi bağlamında, baculovirus insektisitlerinin, diğerlerine göre önemli avantajları nedeniyle tarımsal üretimde giderek yaygın olarak kullanılması beklenmektedir. geleneksel pestisitler.Böcek virüsü preparatlarının yüksek sıcaklık, güneş ışığı, yağmur ve zararlıların yaşı gibi dış koşullara duyarlılığı nedeniyle[18].Bu nedenle, zararlıların larvalarının ortaya çıktığı en yoğun dönemde pestisitlerin uygulanması tavsiye edilir.Yüksek sıcaklık ve ışık gibi olumsuz çevresel koşulların etkisinden kaçınmak için güneşli günlerde saat 16:00-17:00'den sonra kullanmak en iyisidir, böylece virüs formülasyonu rolünü daha iyi oynayabilir ve zararlılar üzerindeki kontrol etkisini geliştirebilir. .